核心期刊文章发表2株新城疫病毒的分离

发布时间：2015-04-15

　　【摘要】盐都、建湖两养殖户鸡群大批死亡，有呼吸道症状，拉稀。剖检喉、气管内有大量黏液，盲肠扁桃体出血，腺胃乳头出血，脂肪肝，脾脏肿大，卵子明显变性，胰脏出血，疑似新城疫病例。采集病鸡的肝，肠道等病变组织。经处理后接种10日龄非免疫鸡胚，致死鸡胚。取鸡胚尿囊液，做HA 试验，两样品均有血凝性，再用抗H5亚型禽流感病毒阳性血清、抗H9亚型禽流感病毒阳性血清和抗新城疫病毒阳性血清进行HI试验，结果显示仅抗新城疫病毒阳性血清对两样品有血凝抑制作用，说明分离到的病毒均为新城疫病毒。通过MDT实验发现两地鸡群感染的新城疫病毒均为强毒株。

　　【关键词】鸡;新城疫病毒;分离;鉴定;血凝试验;血凝抑制试验

　　综述

　　新城疫(ND)，也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是由新城疫病毒引起的一种高度接触性传染病，常呈败血症经过，主要特征是呼吸困难，下痢，神经症状，黏膜和浆膜出血，腺胃黏膜出血具有诊断意义[1]。感染鸡的呼吸道、循环系统、胃肠道紊乱及神经症状都很明显，蛋鸡可有突发性产蛋下降、产薄壳蛋或鸡蛋白蛋。临床表现取决于宿主的年龄及其免疫状态、感染毒株的毒力及嗜性;一般潜伏期为5天[2]。

　　世界范围内曾经发生过4次大规模的流行。首次大爆发源于东南亚和英国，从1926年到1960年，经过30多年的时间，从印泥和英国传遍了全世界。第二次大流行始于20世纪60年代，从中东迅速传播到世界大部分国家，此次流行传播速度较快，原因是养禽业已经拓展为国际贸易，空中运输禽类及珍禽类是此次流行的重要传媒。第三次流行始于1974年前后，疫源地尚无定论，但由于疫苗的推广使用，使得引起疫病流行的病毒更加复杂[3]。第四次流行始于20世纪70年代晚期，源于中东，传染源是鸽副黏病毒I型，1981年传至欧洲，然后迅速传遍世界，并流传至今[4]。特别是20世纪90年代后，该病在欧洲、亚洲许多国家发生，对养禽业造成了巨大的损失。

　　特别值得关注的是鹅的NDV感染，在1997年以前，几乎没有鹅感染NDV发病的报导，即使人工攻毒，水禽的发病率和致死率也较低。但自1997年以后，NDV对鹅的感染率、发病率及病死率明显升高，造成了严重的经济损失。对于鹅NDV来源，究竟是在鹅体内长期试用的结果，还是鸡源NDV的演化，目前没有定论，但从水禽上分离的NDV毒力变化已引起人们的关注。国外学者Rosenberger和Sbortridge分别在加拿大、香港分离出了鹅副黏病毒，国内学者王永坤1997年在江苏的扬州也分离到鹅副黏病毒[5]。这种最近才发生的新病，对小鹅的发病率和死亡率几乎100%，对成年鹅的发病率也达到50%～70%，死亡率达到10%～50%。

　　1、病原及流行病学

　　新城疫病毒属于副黏病毒科腮腺炎病毒属，完整病毒粒子近圆形，直径为120～130nm，有不同长度的细丝。有囊膜，在囊膜的外层呈放射状排列的突起物或称纤突，具有能刺激宿主产生抑制红细胞凝集素和病毒中和抗体的抗原成分，病毒核酸类型为单股、负链、不分阶段的RNA。新城疫是目前我国最常见、最普遍、危害最严重的禽类传染病，归纳本病的流行趋势有以下特点：

　　1)主要发生于小规模、大群体、密集型的农户散养鸡群，通常鸡舍简陋、环境条件差，由于防疫意识不强、饲养管理不善、垫料替换不勤，在冬、春阴雨寒冷季节或夏季高温天气，易造成大面积流行。

　　2)从发病日龄来看，各种日龄的家禽都可发病，临床病例以在15～40日龄、60～120日龄、170～330日龄等三个阶段较为多见。

　　3)经过多次免疫接种、抗体水平较高的鸡群仍可发病，且发病率和死亡率与发病日期、新城疫毒力的强弱、饲养管理的优劣、有无并发症以及诊疗是否及时有关。

　　4)本病主要通过呼吸道和消化道感染发病，健康鸡通过接触病死鸡的排泄物、分泌物、病死鸡污染的饲料、饮水、垫料、空气等传播，病死鸡是本病的主要传染源(目前国内大部分养鸡场对病死鸡不作科学处理是造成疾病不断发生的重要因素)。

　　5)目前虽然我国各地所有鸡群对新城疫采取了强化的免疫预防措施，但新城疫仍然以不同的形式在流行，因此可以说，几乎很难说有哪一个鸡群真正消灭了新城疫病毒的感染，然而，在不同类型的鸡群，NDV感染发生和流行的特点各不相同。在临床上，一般都是以非典型新城疫流行的，在成年鸡群中多表现为一时性产蛋下降(特别是产蛋高峰期)[6]。

　　2、诊断

　　由于急性、典型新城疫的症状和病变与高致病性禽流感十分相似，因此，仅凭症状与病变很难作出准确的判断。可参考鸡群的免疫程序和血凝抑制抗体滴度作出判断，如已有明显的新城疫临床症状和病理变化。至于非典型新城疫，由于其呼吸道症状与传染性支气管炎、传染性喉气管炎、支原体感染和非高致病性禽流感相似，而减蛋综合征、禽流感等多种疾病均可引起产蛋下降，所以凭临床症状和病理变化很难作出非典型性新城疫的初步诊断，必须进行病毒分离鉴定和其他的实验室诊断才能确诊。

　　1)病毒分离与初步鉴定：病料接种9～11日龄的非免疫鸡胚，37℃恒温箱培养，观察鸡胚的死亡情况。

　　2)病毒的进一步鉴定：因禽流感病毒、减蛋综合征等其他一些病毒也具有凝集鸡红细胞的活性，所以在HA呈阳性后，还必须用新城疫抗血清对分离的病毒进行红细胞凝集抑制试验(HI试验)，最好同时分别用新城疫、禽流感和减蛋综合征的抗血清与分离物做HI试验。如果新城疫抗血清能抑制被分离物的HA活性，而其他血清不能将其抑制，则被分离的病毒为新城疫病毒;如病毒的HA活性分别能被新城疫及禽流感的抗血清所抑制，则提示分离物中在感染了新城疫的同时还合并感染了禽流感。在确定为新城疫病毒后，还必须进行病毒的毒力测定，以确定被分离的病毒是野外强毒还是疫苗株病毒。作为一般生产性诊断，可将分离的病毒接种非免疫鸡或SPF鸡，如果病毒能致死敏感鸡，则可确诊。必要时也可进一步作致病指数的测定，包括鸡胚平均死亡时间(MDT)、脑内接种指数(ICPI)、静脉接种指数(IVPI)、已凝集的红细胞洗脱速度、蚀斑形成特点、病毒基因序列分析等[7]。