多肉植物康平寿组织培养快速繁殖试验

发布时间：2022-01-26

　　摘要：以康平寿花茎为外植体，对其组培快繁技术进行了研究。结果表明：花茎是适合的外植体;经过筛选，最适的愈伤诱导培养基为 MS+6-BA 1.5 mg/L+KT 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，最适的分化培养基为 MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L，适宜的增殖培养基为 MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，1/2MS+NAA 0.1 是较好的生根培养基。

　　关键词：多肉植物;康平寿;组织培养;快繁技术

　　康平寿是百合科十二卷属多年生草本植物，原产于南非，植株无茎，肉质叶排成莲座状，最大株幅可达 15 cm以上。康平寿肉质叶肥厚饱满，上半部呈水平三角形，叶色浓绿至墨绿色，顶面光滑，呈透明或半透明状，有灰白色至淡绿色不规则网络状脉纹和细小的白点，花期为春夏季，总状花序，小花灰白色[1]。由于十二卷植物具有自交不亲和性，大多采用分株、叶插等方法繁殖，这些繁殖方法易损害母本生长，且繁殖系数小、繁殖速度慢，无法满足市场需求，导致其价格居高不下[2-6]，采用组织培养的方法可以很好的解决此问题。

　　1 材料与方法

　　1.1 外植体的获取和预处理

　　试验以康平寿的花茎为外植体，康平寿母本种植于浙江省林业科学研究院珍稀植物园。

　　选择健康母本，待其花茎长到1 cm时，每日用0.1%多菌灵可湿性粉剂喷洒1～2次，待花茎抽长到 10～15 cm时，剪取花茎放入无菌袋中。在实验室中将花茎经流水冲洗20 min以上，超净台上以75%的乙醇冲洗30 s后，0.1%升汞 (加入一滴吐温-800℃)浸泡8 min，无菌水浸泡3～5 min后用无菌水冲洗3～5次，将花茎至于超净台的无菌滤纸上备用。

　　1.2 培养方法

　　将预处理后的花茎切成段，分别接种到愈伤组织诱导培养基上。

　　以MS培养基作为基本培养基，根据不同的试验阶段添加不同浓度和配比的细胞分裂素6-BA KT和生长素NAA。培养基中均加入3%蔗糖和0.7%琼脂，pH 值调整为5.8～6.0。外植体接种到不同培养基后，以(25+2)℃为培养温度，光照强度1500～2000 Lux，光照时间为12 h/d。

　　2 结果与分析

　　2.1 不同NAA浓度对康平寿外植体愈伤组织诱导的影响

　　以康平寿花茎为外植体接种到4种不同培养基：(1)MS+6-BA 1.5 mg/L+KT 1.0 mg/L ; (2)MS+6-BA 1.5 mg/L+KT 1.0mg/L+NAA 0.05 mg/L; (3)MS+6-BA 1.5 mg/L+KT 1.0mg/L+NAA 0.1 mg/L; (4)MS+6-BA 1.5 mg/L+KT 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L; 由表1可知，4 种 培 养 基 的 愈 伤 组 织 诱 导 率 分 别 为 0、33.33% 、 86.67%、93.33%，NAA为诱导愈伤组织的主要因素，培养基(1)中没有添加NAA，花茎切口处虽然细胞分裂旺盛，但没有愈伤组织出现。培养基(2)和培养基(3)愈伤组织诱导速度慢。培养基(4)愈伤诱导速度快，质地均匀，淡黄绿色，是适合的愈伤组织诱导培养基。

　　2.2 6-BA、KT不同浓度组合对愈伤组织不定芽分化的影响

　　将在愈伤组织诱导培养基上培养了35d的愈伤组织转接到5种不同的分化培养基上：(1)MS+6-BA 1.0 mg/L;(2)MS +6 -BA 1.0 mg/L +KT 0.5mg/L;(3) MS+6-BA 1.0 mg/L +KT 1.0 mg/L;(4)MS+KT 1.0 mg/L;(5)MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 1.0mg/L。培养14 d开始出现绿色芽点，逐渐形成多个圆形隆起并陆续分化为单个幼芽，再经过14d后，形成丛生芽。从表2可知，愈伤组织在5种不同培养基上均能诱导出不定芽，其中在培养基(2)分化率最高，达到96%。

　　2.3 不同6-BA浓度对增殖生长的影响

　　将分化的不定芽分别转接到添加有不同浓度的 6-BA以及相同浓度的KT和NAA的MS培养基上进行增殖：(1)MS +KT 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L; (2)MS+ 6 -BA 0.25 mg/L + KT 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L;(3) MS+6-BA 0.5 mg/L + KT 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L;(4) MS +6 -BA 0.75 mg/L + KT 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L; (5)MS+6-BA 1.0 mg/L+ KT 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L;培养20d后，统计增殖幼苗的生长情况和增殖系数。由表4可知，培养基(3)是适合的增殖培养基，增殖系数达4.58，无弱苗和玻璃化现象。

　　2.4 生根、炼苗和移栽

　　当增殖芽长到2 cm时，将其切成单株转接到 1/2MS+NAA0.1 mg/L生根培养基上，生根壮苗培养 30 d后，植株逐渐长大并形成具有典型观赏特征的组培苗。将培养瓶移出培养室，置于常温室中自然散射光培养1周后，打开瓶盖，炼苗2~3 d。用清水洗掉附在根上的培养基，并将小苗的根全部去除，只保留根原基，用1000倍多菌灵浸泡15 min，放置通风处晾干 1~2 d后，移栽蛭石等基质中重新发根，成活率能达 85%以上。

　　3 结论与讨论

　　十二卷属的多肉植物由于生长缓慢，叶插等繁殖系数低，实生播种很难保存原母本的优良性状，试验以十二卷属康平寿花茎作为外植体，通过组织培养(过程见图1)，可以有效解决受季节和休眠期限制等问题，从而实现批量化生产，同时也实现了对多肉植物资源的丰富和保护。——论文作者：胡传久，李海波，陈友吾，叶碧欢，胡杨，魏海龙 *

　　参考文献：

　　[1] 王紫珊，王广东，王雁.多肉植物白银寿“奇迹”的离体培养与快速繁殖 [J]. 基因组学与应用生物学，2014，33(16): 1329-1335.

　　[2] 孙涛，李德森.截形十二卷的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学通讯，2002，38(6)：586.

　　[3] 郭生虎，朱永兴，关雅静.百合科十二卷属玉露的组培快繁关键技术研究[J].中国农学通报，2016,32(34)：85-89.

　　[4] 高越，王娅欣，孙涛，等.毛玉露的组织培养与快速繁殖[J]. 生物学通报，2010，45(6)：54-55.

　　[5] 何佳越，刘天乐，余丽萍，等.帝玉露的离体培养及快速繁殖技术研究[J].安徽农业科学，2017,45(8)：148-150+160.

　　[6] 左志宇，李建希，安晓云，等.克里克特寿的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学通讯，2007,43(2)：311