流感病毒两种超滤方法的研究

发布时间：2020-07-23

　　摘要：超滤技术是用于截留液体中目标大小的颗粒，而水和低分子量溶质则允许透过膜。采用世界先进的切向流超滤浓缩技术，分别使用超滤膜包和中空纤维柱对流感病毒(H3N2亚型)超滤浓缩成倍体积，测定血凝价HA。结果HA成倍增加，废液HA呈阴性，病毒回收率达100%。结果表明，两种超滤系统各有优缺点，适用于流感病毒抗原的浓缩。

　　关键词：流感病毒，超滤膜包，中空纤维柱，血凝效价，

　　流行性感冒病毒，是正粘病毒科的代表种，包括人流感病毒和动物流感病毒，人流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，是流行性感冒(流感)的病原体。预防用的灭活疫苗对抗原要求比较高。为了增加单位体积康原来，有必要建立流感病毒浓缩的生产工艺流程。采用切向流超滤浓缩，液体以切向流的形式通过高聚材料的半透膜表面，病毒和大于膜截留分子量的有机大分子被膜截留，其他无机盐和低分子流体透过膜滤出为废液。目前多数疫苗生产厂家采用超滤膜包进行超滤浓缩，美国GE Healthcare Life-Sciences Flexstand中空纤维柱为全新产品，此次研究将分别使用Sartorius Sartocon Slice 超滤膜包和GE Healthcare Life-Sciences Flexstand对流感病毒进行超滤浓缩，对超滤时的进出液体的压力、流量等进行控制，对病毒液的超滤浓缩速度进行测算，对病毒透出液、病毒浓缩液进行血凝效价测定分析，评价两种超滤方式的优缺点。

　　1材料

　　流感病毒(H3N2)毒种：符合毒种规定标准，成都康华生物制品有限公司研发部提供。

　　4小结与讨论

　　4.1采用传统的膜包和最新的中空纤维柱对流感病毒的超滤，浓缩的数倍体积，HA成倍增加，废液中的HA呈阴性，病毒的回收率将近达100%。

　　4.2从超滤操作过程中来看，超滤器的使用比中空纤维柱较为方便。两者的灭菌和清洁处理方面，使用清洁液相同，方法相似。从超滤效率来看，中空纤维柱的等比超滤速度要略高于超滤膜包。

　　4.3灭活疫苗的效力与病毒的浓度有直接的关系，为了快速的产生抗体并维持较长的时间，提高病毒浓度是重要手段。

　　10日龄SPF鸡胚：成都康华生物制品有限公司研发部提供。

　　超滤膜包及夹具：德国Sartorius公司生产。

　　中空纤维柱:美国GE Healthcare Life-Sciences公司生产。

　　2方法

　　2.1病毒液收获 在无菌条件下，万倍稀释流感H3N2亚型毒种，尿囊腔接种10日龄鸡胚，每胚0.2ml，置于温度37℃、湿度55%条件下孵育，收获96h活胚尿囊液，2—8℃保存。

　　2.2超滤浓缩 将尿囊液在无菌工艺下分别用超滤设备浓缩至所需倍数。

　　2.3测定HA 用96孔微量板法分别测定浓缩前、两种设备超滤浓缩后及废液的HA.

　　相关知识推荐：感染学研究论文能投稿哪些期刊　　

　　3结果

　　3.18倍浓缩后的流感病毒的HA变化如表1：

　　4小结与讨论

　　4.1采用传统的膜包和最新的中空纤维柱对流感病毒的超滤，浓缩的数倍体积，HA成倍增加，废液中的HA呈阴性，病毒的回收率将近达100%。

　　4.2从超滤操作过程中来看，超滤器的使用比中空纤维柱较为方便。两者的灭菌和清洁处理方面，使用清洁液相同，方法相似。从超滤效率来看，中空纤维柱的等比超滤速度要略高于超滤膜包。

　　4.3灭活疫苗的效力与病毒的浓度有直接的关系，为了快速的产生抗体并维持较长的时间，提高病毒浓度是重要手段。——论文作者：曾伟