不同浓度乙醇对唐古特大黄(Rheum tanguticum)中总蒽醌沉淀的影响
发布时间：2020-04-27
摘要通过对不同浓度乙醇对唐古特大黄中总蒽醌沉淀影响研究，发现在相同浓度下随乙醇体积的增加，产生的总蒽醌沉淀量呈递减趋势;在相同体积下，随乙醇浓度的增加，产生的总蒽醌沉淀量则呈现增加的趋势，并且75%的乙醇最有利于总蒽醌沉淀的产生。
关键词唐古特大黄，总蒽醌，乙醇
1.引言
唐古特大黄(Rheumtanguticum)，又名鸡爪大黄、西宁大黄，隶属于蓼科(Polygonaceae)大黄属(Rheum)，为多年生高大草本植物，生长于海拔2300~4200m的沟谷林缘、山坡林下、河岸溪边和半阳坡灌丛，主要分布于青海省果洛州、玉树州、黄南州和海南州等地[1]。唐古特大黄以地下根或根茎入药，具有泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通径等功效，是我国著名的传统药材之一。目前，国内外学者对唐古特大黄药用化学成分提取，高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography,HPLC)指纹图谱，有效成分的药理作用，组织培养，以及细胞学等进行了大量研究[2]-[7]，均表明唐古特大黄的质量评价指标性成分主要是蒽醌类衍生物，如大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素和大黄素甲醚等。譬如，张峰[8]应用高效液相色谱法(HPLC)，分析了不同野生居群唐古特大黄的主要药用化学成分与环境因子的关系及其变异规律。熊辉岩[9]采用色谱分离法、外标法定量对3种大黄植物营养器官中游离和结合蒽醌含量进行了测定和比较。有相关研究发现，唐古特大黄药理和临床应用的机理主要是由于它的主要成分蒽醌衍生物对酶、核酸等代谢的作用[10][11][12][13]。因此，研究探讨唐古特大黄中蒽醌类成分的最佳分离条件，具有较高的理论和应用价值。本文笔者在借鉴前人研究[14][15]的基础上，再次较为系统的研究了唐古特大黄中蒽醌衍生物提取与分离的最优条件，旨在为提高青藏高原特有药用植物唐古特大黄的质量提供参考依据和方法。
2.材料与方法
2.1.供试材料
唐古特大黄样品采集时间为2010年10月，采自青海省果洛州，海拔3900m，样品经青海师范大学吴学明教授鉴定为唐古特大黄。将其自然干燥，粉碎，过100目筛后备用。
2.2.仪器与试剂
9F-160型万能粉碎机(河南省荣阳市三张机械厂)，RE-52A型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)，SH2-III循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂)，YX-280B型高压灭菌锅(江阴演江医疗设备厂)，烧杯，滤纸，漏斗，铁架台;90%乙醇，无水氯化钙。
2.3.实验方法
2.3.1.唐古特大黄乙醇浸膏的提取
称取唐古特大黄粉2000g，放入高压灭菌锅内，加入12L、90%的乙醇煮3次，每次2h，收集提取液，将3次提取液合并，然后放入高压灭菌锅内装上冷凝装置，回收乙醇;当高压灭菌锅内提取液剩余约5000mL时，改用旋转蒸发器和循环水真空泵装置回收乙醇，直到得到粘稠状唐古特大黄乙醇浸膏。
2.3.2.不同浓度唐古特大黄乙醇浸膏药液的制备
称取唐古特大黄乙醇浸膏12份，每份50g，平均分成3组;然后分别用不同浓度和体积的乙醇溶解(表1)，放置24h，以使完全溶解;待浸膏可溶物完全溶解后，用漏斗过滤除去不溶物，将其放入烧杯中备用。
2.3.3.总蒽醌沉淀的产生
在上述滤液中逐滴加入适量的10%CaCl2，然后放置24h后，使之产生沉淀。
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3.结果与讨论
诸多学者研究报道了不同提取大黄总蒽醌的方法，如超声强化超临界流体萃取[16];微波加压提取[17];以及不同型号的大孔树脂分离纯化[18][19]等。采用上述方法提取得到的总蒽醌含量差异很大，本文主要研究了唐古特大黄中总蒽醌沉淀与乙醇浓度的关系，筛选蒽醌衍生物提取与分离的最优条件，旨在为提高青藏高原特有药用植物唐古特大黄的质量提供参考依据和方法。利用软件SPSS13.0进行数据分析，研究唐古特大黄中总蒽醌沉淀与乙醇浓度的关系，唐古特大黄中总蒽醌沉淀的变化趋势如表1所示。从表1数据中不难看出：1)在相同浓度下，随乙醇体积的增加，产生的总蒽醌沉淀量呈递减趋势;2)在相同体积下，随乙醇浓度的增加，产生的总蒽醌沉淀量则呈现增加的趋势。此外，据表1数据显示，当乙醇浓度为75%时最有利于总蒽醌沉淀的产生。
同时，有关文献报道，发挥“泻下”药效作用的主要是大黄蒽醌类成分，大黄中的蒽醌类成分以两种形式存在：蒽醌苷和苷元[20]。唐古特大黄中存在的蒽醌类成分多为蒽醌的羟基、羟甲基、甲氧基和羧基衍生物等，它们以可以游离或与糖结合成甙的形式存在于植物体内，而蒽醌甙类与游离蒽醌衍生物在有机溶剂中的溶解度不同，游离蒽醌衍生物易溶于有机溶剂，但唐古特大黄的主要有效成分是结合型蒽醌甙类，所以我们先将蒽醌甙类进行酸水解，再用有机溶剂(如乙醇)提取，其具有提取和分析方法简便、快速、结果准确可靠等特点，对全面评价药物质量及新药源的研究也具有重要作用。
