痫宁一号片质量标准研究
发布时间：2020-03-24
[摘要]目的建立痫宁一号片质量标准。方法采用HPLC法测定痫宁一号片中苯巴比妥的含量;痫宁一号片中硼砂经甲醇提取后，在酸性非水介质中与姜黄素生成红色络合物，采用分光光度法测定其硼砂含量。结果苯巴比妥在50.8—508.0txg·ml范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999);精密度的RSD为1.08%;平均回收率为98.86%，RSD为0.89%。硼砂在1～25Ixg·ml范围内与吸收度呈良好线性关系(r=0.9996)，平均回收率为100.3%，RSD为1.04%。结论所建立的苯巴比妥和硼砂的含量测定方法准确、专属性强，可用于制剂的质量控制。
[关键词]痫宁一号片;苯巴比妥;硼砂;HPLC;分光光度法
痫宁一号片为解放军102医院自制制剂，主要成分为苯巴比妥和硼砂，属抗癫痫药。苯巴比妥具有镇静、催眠、抗惊厥作用，采用口服硼砂和其他药物辅助治疗癫痫大发作及持续性发作，效果满意。两者合用有协同作用，且能降低苯巴比妥的用量，减少不良反应的发生。本文采用HPLC法测定痫宁一号片中苯巴比妥的含量¨I2J，利用姜黄素与硼砂在一定条件下形成红色络合物这一特性，采用分光光度法测定痫宁一号片中硼砂的含量。
1仪器与试药
1.1仪器Waters高效液相色谱仪(2487型紫外检测器，515型泵，EmpowerPro色谱工作站)，(美国Waters公司);752N紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);FA1004电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂);XS105电子分析天平(梅特勒.托利多仪器有限公司)。
1.2试药痫宁一号片(规格：O.3g，解放军102医院制剂中心生产，批号：20090914、20100122、20101215);苯巴比妥对照品(中国药品生物制品检定所);姜黄素，硼砂(国药集团化学试剂有限公司)，甲醇、浓硫酸、冰醋酸均为分析纯;水为纯化水。
2方法与结果
2.1性状本品为白色片剂。
2.2鉴别(1)苯巴比妥在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。(2)硼砂取本品的水溶液，加盐酸成酸I生后，能使姜黄试纸变成棕红色;放置干燥，颜色即变深，用氨试液湿润，即变为绿黑色。
2.3含量测定
2.3.1苯巴比妥(1)溶液的制备精密称取苯巴比妥对照品0.1016g，置100ml量瓶中，加硼酸.氯化钾缓冲液(取硼酸3.09g，加0.1mol·L氯化钾溶液500ml使溶解，再加0.1mol·L氢氧化钠溶液210ml，即得)适量，超声溶解10min，稀释至刻度，摇匀，用0.45m微孔滤膜滤过，取续滤液，作为对照品贮备液。取痫宁一号片20片，研成细粉，精密称取0.3g，置100ml量瓶中，加硼酸.氯化钾缓冲液适量，超声溶解10min，稀释至刻度，摇匀，用0.45m微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。将硼砂和辅料按处方比例混匀，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
(2)色谱条件流动相：甲醇.磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g，加三乙胺0.2ml，加水至1000m1)(47：53);柱温：25oC;检测波长：230nm;流速：1.0ml·min～;进样量：20l。
(3)专属性试验精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液，按上述色谱条件记录色谱图。结果在对照品色谱相应的位置上，供试品具有相同保留时问的色谱峰，而阴性对照溶液无干扰。图中理论塔板数按苯巴比妥计不低于5000，色谱峰的分离度大于1.5，色谱图见图1。
(4)线性关系考察分别精密吸取苯巴比妥对照品贮备液适量，加硼酸一氯化钾缓冲液稀释制得50.8、101.6、203.2、406.4、508.0g·ml的系列浓度溶液，精密吸取上述各浓度的对照品溶液20l进样，在上述色谱条件下测定峰面积，以峰面积(Y)为纵坐标，对照品浓度(C)为横坐标，得回归方程：
Y=14835C+65235，r=0.9999，/2=5
表明苯巴比妥在5O.8～508.0g·ml范围内线性关系良好。
(5)精密度试验按上述色谱条件，精密吸取对照品溶液(101.6g·ml)20}zl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件，连续进样5次，分别记录苯巴比妥的峰面积，其平均值为1515151，RSD为1.08%，说明本方法精密度良好。
(6)重复性试验取样品(批号：20101215)，按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，精密吸取各溶液20l，按上述色谱条件测定，分别记录苯巴比妥的峰面积，计算苯巴比妥的平均含量为100.86%，RSD为0.56%，说明本方法重复性良好。
(7)稳定性试验取供试品(批号：20101215)溶液，按上述色谱条件，分别于0、1、3、6、9、12h进样20l，并记录苯巴比妥的峰面积，RSD为0.68%，表明供试品溶液在12h内稳定。
(8)回收率试验精密称取同一批次已知含量的样品(批号：20101215)细粉9份，每份0.15g，分3组，每组3份，加入对照品适量，使供试品中苯巴比妥的含量为样品中的80%、100%、120%，按供试品制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，并计算回收率，结果见表1。
2.3.2硼砂(1)溶液的制备取硼砂100mg，精密称定，用甲醇配制成浓度为1mg·ml的溶液，作为标准贮备液，于4℃冰箱中保存。姜黄素冰醋酸溶液：称取0.04g姜黄素，溶于100ml冰醋酸溶液中，贮存于聚丙烯瓶保存于4℃冰箱中备用。浓硫酸.冰醋酸溶液：分别量取等量的浓硫酸、冰醋酸，均匀混合。取本品20片，研磨成细粉，取约0.3g，精密称定，加甲醇适量超声溶解后定容至100ml，取溶液滤过，弃去粗滤液，精密量取续滤液5ml，加甲醇定容至50ml。精密量取上述溶液1ml置25ml量瓶中，加入0.04%姜黄素溶液1ml及浓硫酸一冰醋酸溶液(1：1)15ml，摇匀，以甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。将苯巴比妥和辅料按处方比例混匀，按供试品溶液的制备方法配制阴性对照溶液。
(2)吸收光谱以不加姜黄素溶液的试剂作空白溶液，将对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液用分光光度计于400～700nm范围测定其吸收曲线。结果表明：对照品溶液和供试品溶液均在530nm波长处有吸收峰，而阴性对照溶液在此波长处无吸收峰。
(3)线性关系考察精密量取标准硼砂贮备液25、125、250、375、500、625Ixl，分别置6个25ml量瓶中，分别加入0.04%姜黄素溶液1ml及浓硫酸一冰醋酸溶液(1：1)15ml，摇匀，以甲醇稀释至刻度，配制成1、5、1O、15、20、25g·ml的系列浓度，以不加姜黄素溶液的试剂作空白，于530nm波长处，测其吸光度(A)，得回归方程：
A=3.3×10一C+0.2917.r=0.9996
表明硼砂溶液在1～25I,zg·ml范围内与吸收度呈良好线性关系。
(4)精密度试验取同一供试品(批号：20101215)溶液，重复测定5次，记录其在530nm波长处的A值，RSD为0.56%(n=5)，说明精密度良好。
(5)稳定性试验取同一供试品(批号：20101215)溶液，分别于配制完成后0、1、2、3、4h进行测定，记录其在530nm波长处的A值，RSD为1.74%(n=5)，说明供试品溶液在配制后4h内稳定。
(6)重复性试验取样品(批号：20101215)，按供试品制备方法制备5份供试品溶液，记录其在530nm波长处的A值，代入回归方程计算其硼砂的含量平均为97.2%，RSD为1.31%(n=5)，表明该方法有较好的重复性。
(7)回收率试验精密量取已知硼砂含量的样品溶液1ml，置于25ml量瓶中，准确加入标准硼砂贮备液200、250、300l，加入0.04%姜黄素溶液1ml及浓硫酸.冰醋酸溶液(1：1)15ml，摇匀，以甲醇稀释至刻度。于530nm波长处，测其A值，计算回收率结果见表2。
2.4痫宁一号片含量测定取3批痫宁一号片样品，每批取样品2O片，研成细粉，精密称定，按供试品制备方法制备供试品溶液，分别按相应成分含量测定方法进行测定，结果见表3。本品每片中含苯巴比妥应为标示量的90%～110%，含硼砂应为标示量的90%～110%。
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3讨论
据文献[2]报道，HPLC法测定苯巴比妥的含量，多直接采用流动相提取样品中的苯巴比妥，本实验曾采用甲醇一水不同比例处理样品，但结果均不理想。痫宁一号片的另一主要成分为硼砂，采用甲醇一水溶液处理样品，硼砂改变溶液的pH，使样品溶液呈碱性，而对照品溶液中由于不含有硼砂，溶液显弱酸性，所以样品溶液与对照品溶液中苯巴比妥的存在形式不同。研究发现，采用硼酸一氯化钾缓冲液处理样品，使样品溶液和对照品溶液均显碱性，故样品与对照品出峰时间一致，且峰形较好。姜黄素分子两端具有两个羟基，在酸性条件下可与硼砂发生络合反应，生成红色物质，故通常用姜黄素冰醋酸溶液作为硼砂的显色剂。该方法操作简单，形成的络合物稳定，故可用于痫宁一号片中硼砂的含量测定。本文建立了痫宁一号片中苯巴比妥和硼砂的含量测定方法，方法简便，结果可靠，可用于本制剂的质量控制。
