蒙药红花清肝十三昧丸中丁香酚含量的测定方法研

发布时间：2020-03-21

　　摘要：目的：建立内在质量监控指标，提高药品质量标准。方法：采用气相色谱法测定丁香酚的含量。结果：丁香酚在40ng～400ng范围内呈良好线性关系，回归方程Y=1387.6X一2812.2R=0.9995，平均回收率为99.78%，RSD为0.62%。结论：该方法简便、灵敏、准确，可用于红花清肝十三味丸的内在质量监控。

　　关键词：红花清肝十三味丸;气相色谱法;丁香;丁香酚;含量测定

　　红花清肝十三味丸(古日古木一13)质量标准收载于1998年版《卫生部药品标准》蒙药分册由红花、丁香、莲子、麦冬、木香、诃子、川袜子、栀子、紫檀香、麝香、水牛角浓缩粉、牛黄、银珠组方。

　　蒙医临床上用于清肝热治疗，如药物中毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝;另对血热引起的眼病治疗也很有效。原质量标准不能够很好的进行内在质量的控制，故参照《中国药典》2005年版一部2及相关文献项下方法，对方中君药丁香采用GC法对其有效成分丁香酚进行分析研究，为进一步完善与提高现行质量标准打下了基础。

　　1材料与方法

　　1.1材料

　　红花清肝十三味丸(批号：080305、080308、

　　080312;来源：内蒙古乌兰浩特中蒙药厂)。

　　1.2仪器与试药

　　仪器：日本岛津GC2010型气相色谱仪，FID检测器，AOC-20i自动进样器，GCsolution色谱工作站。MettlerAE100型电子天平，KQ-500DE超声处理器。试剂：正己烷为分析纯，水为纯化水。

　　对照品：丁香酚对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号725-200708，供含量测定用)。色谱条件：色谱柱为HP-innowax柱(30.0mm×0.32mm，0.25um)，以聚乙二醇(PEG)-20M为固定相，涂布浓度为10%，载气(N3)流速为42.2cm/sec，进样口温度为210℃，柱温为190℃，检测器温度为210℃，进样量为2uL。理论板数按丁香酚峰计算不低于1500。

　　1.3溶液的制备

　　对照品溶液的制备;精密称取丁香酚对照品0.10201g，置5mL量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，精密量取1mL，置250mL量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，制成每1mL含81.608ug的溶液，即得。

　　供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，研细，取约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入正己烷20ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40kMz)15min，放冷，再称定重量，用正¨己烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　1.4测定法

　　分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各2uL，注入气相色谱仪，测定，即得。

　　2方法学考察

　　2.1专属性考察

　　按制备工艺制备缺丁香药材的阴性样品适量1，研细，取约1.5g，精密称定，按供试品溶液制备项下方法制备阴性对照溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱图，试验结果表明，处方中其他药味对丁香酚测定没有干扰。

　　2.2提取条件的确定

　　精密称取供试品约l.5g，分别超声提取不同时间，按拟定方法制备供试品溶液，测定其含量。

　　试验结果表明超声15min比超声10min含量明显增高，而超声15min和超声20min含量没有明显差别，说明超声15min丁香酚即可提取完全，故选择超声处理15min(见表1)。

　　2.3线性关系考察

　　精密称取丁香酚对照品0.10201g，置5mL量瓶中，加正已烷溶解并稀释至刻度，精密量取lmL，置250mL量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，分别精密吸取该溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0uL，注入气相色谱仪，以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归分析，试验结果表明，丁香酚在40mg~400ug左右范围内呈良好的线性关系。回归方程为，Y=1387.6X-2818.2R=0.9995，标准曲线(见表2)。

　　2.8样品含量测定

　　三批样品每批平行取样2份，每份取约1.5g，按溶液制备项下方法制备供试品溶液和对照品溶液，按上述色谱条件测定[”](见表7)。

　　2.4精密度试验

　　取供试品(批号：080305)约1.5g，精密称定，按溶液制备项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定丁香酚蜂面积积分值(见表3)。

　　2.5稳定性试验

　　取供试品(批号：080305)约1.5g，精密称定，按溶液制备项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件分别于0h、2h、4h、6h、12h、24h进样测定。结果表明，丁香酚在24h内峰面积积分值基本稳定(见表4)。

　　2.6重复性试验

　　取同一批号供试品(080305)5份，每份取样量约1.5g，精密称定，分别按溶液制备项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定每份的含量(见表5)。

　　2.7加样回收率试验[4-71精密称取已知丁香酚含量的供试品(批号：080305，含量0.732mg/g)6份，每份取样量约为0.75g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，分别精密加入丁香酚对照品0.750mg，按溶液制备项下方法制备模拟供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率(见表6)。

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　　3小结

　　试验结果表明，组方中其他药材所含成分对丁香酚基本无干扰，样品峰形良好，平均回收率为99.78%，前处理简单快捷，结果准确，专属性良好。故认为该方法为红花清肝十三味丸中丁香酚的含量测定提供了技术依据0.]，可以作为提高该品种药品质量标准的参考方法。