基于快速溶剂萃取的在线固相萃取-气质法测定鸡蛋中氟虫腈及其代谢物
发布时间：2020-03-17
摘要：建立了鸡蛋中氟虫腈及其代谢物集提取和净化为一体的快速溶剂萃取-在线净化检测方法。样品经硅藻土分散后，装人底部有混合均勻的吸附净化剂和硅藻土的萃取池中，以乙腈为溶剂用APLE-3500萃取并同时完成净化，提取液经氮吹浓缩近干，乙腈定容至0.5mL，0.45#m有机滤膜过滤，GC-MS测定，内标法定量。该方法在0.02〜1.00#g/mL范围内呈现良好的线性关系，相关系数(r)均不小于0.999,在0.025、0.05、0.1#g/g3个浓度添加水平下氟虫腈及其代谢物的回收率为82.5%〜115.7%，相对标准偏差(RSD)为1.0%〜5.6%，检出限为3〜7#g/Xg(S/N=3)，定量限为9〜20#g/kg(S/N=10)。该方法自动化程度高，提取效率高，精密度好，简单，快捷，适用于鸡蛋中氟虫腈及其代谢物残留量的检测。
关键词：氟虫腈及其代谢物鸡蛋GC-MS快速溶剂萃取(APLE)
i前言
氟虫腈是一种广谱杀虫剂，能有效杀灭跳蚤、螨虫等有害生物，被世界卫生组织列为“对人类有中度毒性”的化学品。鸡蛋是人们比较喜爱的食品，然而近两年来不断有报道鸡蛋中检出氟虫腈，尤其是2017年荷兰的“毒鸡蛋”事件，引起了各国对鸡蛋中氟虫腈及其代谢物含量的重视。欧盟、美国和中国香港对鲜蛋中氟虫腈的限量要求分别为0.005、0.03、0.02mg/kg。国际食品法典委员会对蛋类中氟虫腈的限量要求为0.02mg/kg,但对氟虫腈代谢物的限量无明确规定。我国自2009年10月1日起禁用氟虫腈，并在GB2763—2016中明确规定了氟虫腈在谷物、蔬菜中的最大残留限量，但对于蛋类中的最大残留限量未做规定。
目前，食品中氟虫腈及其代谢物检测常用的前处理方法有固相萃取法[1—3]、QuEChERS法[4-6、振荡提取法(AOAC.2007.01)7，分散固相萃取8等，常用的检测方法有气相色谱法[9]，气相色谱-质谱(GC-MS)法[3,7,8，10]，气相色谱-串联质谱(GCMS/MS)法[6，11]，高效液相色谱法-]和液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)[1’2’12]等。本研究采用快速溶剂萃取仪(APLE)提取，在线固相萃取净化，GCMS法测定鸡蛋中氟虫腈及其3种代谢物(氟甲腈，氟虫腈亚砜和氟虫腈砜)#该方法集提取和净化一步完成，大大缩短了样品前处理消耗的时间，有机溶剂用量少，操作简单，分析快速，适用于鸡蛋中氟虫腈及其代谢物残留量的日常检测工作。
2、材料与方法
2.1仪器与试剂
仪器:APLE-3500快速溶剂萃取仪(北京吉天仪器有限公司"配有1lmL萃取池;氮吹浓缩仪;冷冻干燥机FI>1A-50(北京博医康实验仪器有限公司"GCMS-QP2010SE气相色谱质谱仪(日本岛津)。
试剂：乙酸乙酯中锐劲特(氟虫腈"丙酮中氟虫腈亚砜、丙酮中氟虫腈砜、丙酮中氟甲腈、正己烷中环氧七氯，购于农业部环境保护科研监测所，浓度均为100#g/mL;分散固相萃取纯化管(dSPE:150mgMgS04，50mgPSA，50mgC18，7.5mgGCB，2mL)CN]只只;乙腈(色谱纯"丙酮(色谱纯"硅藻土(北京吉天仪器有限公司)。
样品：市售生鸡蛋去壳搅碎后冷冻干燥24h，粉碎机粉碎密封冷冻储存。
2.2实验方法
2.2.1标准溶液的配制
混标储备液的配制：准确移取10〇#g/mL的4种目标物的母液各0.5mL至10mL的容量瓶，用乙腈定容至刻度，配成浓度5#g/mL的混标储备液，临用时稀释。
内标溶液的配制：准确移取10〇#g/mL的环氧七氯母液0.5mL至25mL的容量瓶$用丙酮定容至刻度，配成浓度2#g/mL的内标储备溶液。
标准曲线的制备：准确移取5#g/mL的混标储备溶液，用不含目标物的样品基质溶液配制成0.02#g/mL、0.05#g/mL、0.1#g/mL、0.2#g/mL、0.5#g/mL、1.00#g/mL混合标准工作溶液。
2.2.1气相色谱-质谱条件
气相条件：色谱柱\tx®-5SilMS，0.25mmX0.25#mX30m;进样口温度260°C，不分流进样;柱温60°C，保持1min，以25°C/min升至125°C，以10°C/min升至300°C保持10min;柱流速1.0mL/min;进样量1.0#L。
质谱条件：四极杆温度150°C;离子源温度230°C;接口温度300°C;扫描模式SIM;溶剂延迟时间5min。4种分析物及内标的质谱参数见表1，分离情况见图1。
2.2.3样品前处理
准确称取粉碎后的鸡蛋样品1.0000g(精确至0.0001)，硅藻土1.0000g研磨均匀后装入11mL萃取池，池底装有2.0g硅藻土和6支dSPE纯化管中的吸附剂(300mgPSA、300mgC18、45mgGCB、0.9gMgS04)混合均一的体系，作为在线净化吸附剂，密封萃取池，置于APLE-3500进行萃取，萃取条件见表2。萃取液经氮吹浓缩近干，加入100#L内标溶液，用乙腈定容至0.5mL，过0.45#m有机滤膜，待GC-MS分析。
3结果与讨论
3.1样品前处理条件的选择
鸡蛋样品含有大量的蛋白质和脂肪，乙腈的极性强，具有沉淀蛋白质的作用且能够提取出较少的脂肪，萃取液清澈，有效降低基质干扰效应。另一方面乙腈提取效率高，原因可能是氟虫腈及其代谢物与乙腈含有相同的-CN基团，根据相似相容的原理，容易被乙腈萃取出来[12]。因此选用乙腈作为萃取溶剂。混合吸附剂PSA和C18能够有效去除脂肪、碳水化合物等杂质，GCB能够有效吸附色素，MgS04能够除去水分
快速溶剂萃取过程中循环次数直接决定萃取所需有机溶剂的体积及整个萃取流程所消耗的时间，从而影响萃取效率。APLE-3500最多可设定3次循环，通过空白加标实验，采用APLE-3500特有的序列模式将三次循环的收集液分别收集到3个样品瓶中，考察每次循环中目标物的含量，从而决定萃取过程选用的萃取次数。3次循环中目标物的百分含量见表3。由表3的考察结果可知，通过2次循环萃取，目标物已完全萃取出来，第3次循环萃取液中几乎不含有目标物，因此循环次数选用2次。
3.2方法定量性考察
3.2.1方法重复性
用不含目标物的样品基质溶液配制0.1#g/mL混合标准溶液，连续进样6针，以目标物峰面积的偏差考察仪器方法的重复性，结果见表S。S种目标物及内标的相对标准偏差RSD为1.0%〜2.6%，表明仪器具有良好的重复性。
3.2.2方法检出限、定量限及线性
采用不含目标物的样品基质溶液配制一系列的标准工作液，以S种目标物的定量离子峰面积为纵坐标，相应的质量浓度(#g/g)为横坐标，进行线性回归计算，得到线性方程、线性范围和相关系数(以信噪比S/N=3确定检出限(limitofdetection，L0D)，S/N=10确定定量限(limitofquantification，L0Q)。结果如表5所示，方法在0.02!1#g/mL(0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1#g/mL)范围内线性关系良好，线性相关系数!)'0.9990。
3.2.3方法的回收率及精密度
以空白鸡蛋样品为加标基体，在"025、0.05、0.l#g/g3个加标浓度水平下进行回收率实验，所得结果见表6,氟虫腈及其3种代谢物的回收率在82.5%〜ll5.7%之间，相对标准偏差(RSD)为1.0%〜5.6%。结果表明，该方法具有良好的精密度和准确性。
4结论
在APLE-3500萃取的基础上建立了一种集提取和净化一步完成的样品前处理方法，与GC-MS联用内标法测定鸡蛋中氟虫腈及其3种代谢物。提取液经氮吹浓缩过膜后，供GC-MS分析，得出氟虫腈及其代谢物在0.025、0.05、0.1#g/g3个浓度添加水平下的回收率为82.5%!115.7%，RSD为1.0%!5.6%，检出限(S/N=3)为3〜7#g/kg，定量限(S/N=10)为9!20#g/kg。该方法溶剂用量小，耗时少，提取效率高，操作简便，能够为鸡蛋中氟虫腈及其代谢物的提取及检测提供有效的参考。
基于快速溶剂萃取的在线固相萃取-气质法测定鸡蛋中氟虫腈及其代谢物相关期刊推荐：《现代食品科技》(月刊)创刊于1985年，由华南理工大学主办。本刊立足广东，辐射全国，作为广东地区唯一的、拥有国内、国际刊号的食品科技杂志，本刊以报导食品的新成果、新产品、新技术、新工艺及科技动态为已任，是广东省食品科技的桥头堡，在广东食品界拥有举足轻重的作用。目前，设有基础研究、工艺技术、食品安全与检测、专题与论述、教学探索、专题与论述等栏目。
