HPLC法同时测定助产凝胶中黄芩苷、厚朴酚及和厚朴酚含量

发布时间：2020-02-14

　　【摘要】目的 建立HPLC同时测定助产凝胶中黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚的质量控制方法。方法 色谱条件：HypersilODSC18柱，流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液为，梯度洗脱，检测波长为280nm，流速为1.0mL/min，柱温35℃。结果 色谱峰分离情况良好，黄芩苷、厚朴酚、和厚朴酚在各自的浓度范围内均具有良好的线性相关性;加样回收率为96.5%~98.4%,其RSD为0.47%~1.21%。结论 所建质量控制方法准确、简便、重现性好，可用于助产凝胶抑菌成分的定量考察。

　　【关键词】助产凝胶;高效液相色谱法;黄芩苷;厚朴酚;和厚朴酚

　　凝胶高分子材料的高安全性使润滑剂助产被批准用于人类分娩，由于在分娩过程中母亲和胎儿的免疫水平低下，局部和全身感染的机会增加，助产凝胶中需要加入抑菌成分[1-2]。具有抑菌活性的天然药物，如黄芩、厚朴等在临床上被长期使用，安全性高[3-4]，其主要活性成分黄芩苷、厚朴酚与和厚朴酚有广谱的抗菌活性。黄芩苷对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌作用较强，厚朴酚与和厚朴酚通过影响白色念珠菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌等细胞膜的通透性而发挥抑制作用[5-6]。联合使用能显著提高助产凝胶的抗菌谱和抗菌活性。以黄芩苷、厚朴酚与和厚朴酚等天然产物为抑菌成分，配以泊洛沙姆等凝胶材料制备的助产凝胶具有抑菌和润滑功能，用于产妇分娩过程中的助产。本研究旨在建立助产凝胶的抑菌活性成分的含量测定方法，为助产凝胶的质量控制提供依据。

　　1 仪器与试药

　　ShimadzuLC-16A高效液相色谱仪：四元泵，SPD16AV紫外检测器，LabSolutions色谱处理工作站(日本岛津公司)。KQ50B型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。甲醇为色谱纯，美国天地公司;磷酸为分析纯，国药集团化学试剂有限公司。

　　黄芩苷、厚朴酚与和厚朴酚对照品由上海阿拉丁生化科技股份有限公司购买，助产凝胶：江苏南大耐雀生物技术有限公司，批号：20180712、20180725、20180820。

　　2 方法与结果

　　2.1色谱条件

　　色谱柱：AgilentHypersilODSC18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱(0~15min,52:48;15~18min,55:45;0~15min,90:10);流速为1.0mL/min;柱温为35℃，检测波长为280nm;进样量为20μL;理论塔板数按黄芩苷计不得低于3000。

　　2.2对照品溶液的制备

　　精密称取黄芩苷对照品10mg、和厚朴酚对照品20mg、厚朴酚对照品25mg，加80%甲醇溶液溶解并定容至10mL，作为对照品贮备液。并将其稀释得到黄芩苷浓度为0.0362mg/mL，和厚朴酚浓度为0.1701mg/mL，厚朴酚浓度为0.2222mg/mL的混合对照品溶液。

　　2.3供试品溶液的制备.

　　精密称取助产凝胶2.0g，加80%的甲醇溶液溶解并定容至50mL，经3000r/min的离心15min，取上清液作为供试品溶液。

　　2.4线性关系的考察

　　精密量取“2.2”项下混合对照品溶液2、4、68、10mL，甲醇定容至10mL，共得6个浓度的对照品溶液。分别精密吸取20μL，按“2.1”项下条件测定，以浓度c为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，得回归方程、相关系数及线性范围为：A=159712c+4431，r=0.999，7.24~36.2μg/mL(黄芩苷);A=31815c+82945，r=0.9996，34.016~170.08μg/mL(和厚朴酚);A=24591c+45900，r=0.9992，44.44~222.2μg/mL(厚朴酚)。其质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，对照品的色谱图如图2所示。

　　2.5精密度试验

　　精密吸取对照品溶液20μL，连续进样6次，测定其峰面积，黄芩苷RSD=1.21%，和厚朴酚RSD=0.80%，厚朴酚RSD=0.37%。

　　2.6重复性试验

　　按“2.3”项下方法制备供试品溶液6份，精密吸取20μL，按“2.1”项下条件测定，黄芩苷RSD=1.05%，和厚朴酚RSD=0.64%，厚朴酚RSD=1.87%。

　　2.7稳定性试验

　　精密吸取供试品溶液20μL，分别于0、2、4、6、8、10h测定，黄芩苷RSD=1.06%，和厚朴酚RSD=0.32%，厚朴酚RSD=1.73%。

　　2.8加样回收率试验

　　精密称取已知含量的助产凝胶1.0g共6份，分别加入一定量对照品贮备液，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，结果见表1。

　　2.9样品含量的测定

　　取三批助产凝胶样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，并测定含量，结果见表2。

　　3 讨 论

　　(1)厚朴酚与和厚朴酚的紫外最大吸收波长(λmax)为294nm，黄芩苷的λmax为278nm，但黄芩苷在294nm波长处的吸收衰减明显大于厚朴酚与和厚朴酚在278nm处的衰减，最终选择280nm对助产凝胶中的三个主要活性成分在同一条件下进行含量测定，黄芩苷、和厚朴酚与厚朴酚均有较强吸收。

　　(2)助产凝胶采用甲醇-水体系进行分离，厚朴酚与和厚朴酚可有效分离，但黄芩苷峰行较差。黄芩苷因羧基结构显酸性，流动相应降低pH，以保证目标物处于非解离态，从而提高其保留能力，改善分离，故添加0.1%的磷酸使流动相成弱酸性，实验证明效果很好。方法学研究结果表明，该检测方法线性、精密度、稳定性、回收率良好，适合本品的含量测定。本研究建立了助产凝胶中活性成分黄芩苷、厚朴酚与和厚朴酚的含量测定方法，为助产凝胶的质量控制提供保障。

　　(3)近年来，围绕着最佳分娩结果的目的，希望开发出能够减小不良后果、缩短分娩时间的助产技术。具有润滑、抑菌功能助产剂在产道内形成一层具有润滑性的黏附薄膜，从而减小胎儿与产道之间的摩擦力，能够缩短产程、减少分娩痛苦和分娩创伤，有利于保护母亲和新生儿[7-8]。随机临床试验表明，助产剂可以有效避免外阴切开术，保护会阴的完整性;分娩第二阶段后期用助产剂可以有效缩短分娩时间，减小产妇和新生儿受伤的风险[9]。助产凝胶为助产技术提供了安全、有效的新方法，在减轻产妇痛苦、保护产道和胎儿方面具有很好的效果。

　　HPLC法同时测定助产凝胶中黄芩苷、厚朴酚及和厚朴酚含量相关期刊推荐：《现代妇产科进展》杂志，是由中华人民共和国教育部主管，山东大学主办。1989年创刊，由全国著名妇产科专家江森教授任主编。以报道国内外妇产科学的进展为宗旨，刊发临床、科研、手术创新、经验交流、疑难病例讨论等各层次学术论文。2004年起紧密结合临床推出、实用的“临床热点问题讨论”栏目。