HPLC法测定牛黄解毒片的溶出度

发布时间：2020-02-13

　　摘要：目的：建立牛黄解毒片中黄芩苷溶出度测定方法。方法：以10%的乙醇为溶出介质，转速为100r·min-1，取样时间为60min。采用HPLC法，色谱柱为C18柱;流动相为甲醇-水-磷酸(44：56：0.2);检测波长为315nm。测定累积溶出百分率，绘制溶出曲线，并进行样品的溶出度测定。结果：黄芩苷浓度在0.0205～0.1432mg·mL-1范围内有良好的线性关系(r=0.9998);平均回收率为98.75%，RSD为0.47%。不同批次，不同片剂类型的牛黄解毒片溶出度差异大。结论：该方法简便、可行，重现性好，可用于牛黄解毒片质量控制。

　　关键词：牛黄解毒片;高效液相色谱;黄芩苷;溶出度

　　牛黄解毒片是目前临床应用比较广泛的一种纯中药制剂，主要由大黄、黄芩、雄黄、甘草、冰片等药材组成，具有清热解毒之功效[1]。其主要有素片、糖衣片和薄膜衣片三种剂型。该处方中黄芩主要有清热燥湿，泻火解毒[2]的功效，对牛黄解毒片的主要功效的贡献较大。黄芩的主要成分为黄芩苷，据有关文献报道，很多中药制剂采用HPLC法测定其黄芩苷的含量[3-5]，本文采用HPLC法对牛黄解毒片的黄芩苷溶出度进行研究，为牛黄解毒片在体内的吸收利用的评定提供依据。

　　1仪器与试药

　　Agilent1200高效液相色谱仪(安捷伦);ZRS8G智能溶出试验仪(天大天发);重蒸水，所用试剂均为分析纯;牛黄解毒片素片(批号：161204，161205，160103);牛黄解毒片糖衣片(批号：160304，160317，160406，160417，160505);牛黄解毒片薄膜衣片(批号：160210，160704，160902，161003，161005，161009，161010，161201);黄芩苷对照品：中国药品生物制品检定所(批号：150511-201516);

　　2方法与结果

　　2.1色谱条件

　　色谱柱：C18(4.5×150mm，5μm);流动相：甲醇-水-磷酸(44：56：0.2);柱温：30℃;检测波长：315nm;进样量：10μL。

　　2.2对照品和供试品溶液制备

　　精密称定黄芩苷对照品约10.23mg，置100ml容量瓶中，加60%乙醇溶液定容，即得对照品溶液。取本品20片，研细，精密称定约0.26g，置具塞锥形瓶中，加入60%乙醇25ml，超声处理20分钟，放冷，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

　　2.3专属性考察

　　按照质量标准中记载的牛黄解毒片处方及制备工艺，制备不含黄芩的样品，做为阴性对照品，分别取自制的缺黄芩的阴性对照品、供试品和对照品溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱图，结果黄芩苷对照品与供试品在4.7分钟时均有相应的色谱峰，而其阴性对照品在此处未出峰，见图1。

　　2.4线性关系考察

　　精密称取黄芩苷对照品20.46mg，置于100ml的容量瓶中，加60%乙醇使溶解并稀释至刻度，再分别精密量取1.0、2.0、3.0、5.0、6.0、7.0ml的溶液置10ml容量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，精密量取上述各浓度的对照品溶液10u1，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以黄芩苷的峰面积(Y)对浓度(X)线性回归，得到回归方程为Y=49.5215X+0.010025，R=0.9998。表明黄芩苷浓度在0.0205～0.1432mg/ml范围内线性关系良好。

　　2.5精密度试验

　　按照上述色谱条件，精密吸取上述黄芩苷对照品溶液10μL，连续进样6次，同时测定其峰面积，得RSD为0.36%，表明该方法的精密度良好。

　　2.6稳定性试验

　　取同一批供试品溶液(批号：160210)，分别于0、3、6、9、12、18、24小时进样10u1，记录色谱图，得黄芩苷的峰面积RSD为1.06%，表明该溶液在24小时内稳定。

　　2.7黄芩苷加样回收率试验

　　取供试品(批号：160210)约0.26g，9份，精密称定，3份为1组，分别精密加入对照品溶液6，7，8mL，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。

　　2.8黄芩苷溶出度的测定

　　2.8.1溶出介质的选择黄芩苷易溶于水，曾用水、pH8磷酸盐缓冲液、50%乙醇等作为溶剂进行选择[7]。结果表明，黄芩苷在乙醇溶液中的溶出量比较大，又将乙醇溶液配制成不同的浓度进行试验，结果发现，溶出介质为10%乙醇溶液时，溶出量优于其它浓度，因此选择10%乙醇溶液作为本品的溶出介质。

　　2.8.2溶出曲线的考察分别取素片(批号：161204)、薄膜衣片(批号：160704)和糖衣片(批号：160317)样品，照溶出度测定法(通则0931第三法)[6]，以10%的乙醇100mL为溶出介质，转速为100r·min-1，依法操作，分别于15，30，45，60，90min各取样2mL，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液;依据上述色谱条件，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算累积溶出量(见表2)，并绘制溶出曲线(见图2)。

　　2.8.3溶出度的测定结果根据上述表格中牛黄解毒片样品的溶出实验结果发现，45分钟后，糖衣片中黄芩苷的累积溶出率仅为50%，1个小时后，普通素片中黄芩苷累积溶出率达100%，薄膜衣片中黄芩苷累积溶出率达95%，而糖衣片累积溶出率84%。90分钟后三批牛黄解毒片基本完全溶出，但是时间太长，因此，综合各方面考虑，最终将取样时间定为60分钟。根据上述方法于60分钟取样，测定样品中黄芩苷的溶出度，计算其溶出率，结果见下述表3。

　　3讨论

　　溶出度是片剂质量控制的一个重要指标，但是现行的中药制剂的质量标准中，除了极个别品种需要检查溶出度外，大多数中药制剂仅仅依靠制剂通则中的崩解时限检查评定其生物利用度。本次研究中16批牛黄解毒片样品的溶出度相差比较大，结果显示，不同厂家及同一厂家不同批号之间牛黄解毒片溶出度差异比较大，这严重影响了药物在体内的吸收，使得药物达不到该有的疗效。建议生产厂家要注意改进药品的生产工艺，控制药品的生产流程，提高牛黄解毒片的溶出度，达到提高药物疗效的目的。此外，结果表明在普通素片、糖衣片和薄膜衣片这三种剂型中，素片的溶出率最高，60分钟内，8批薄膜衣片的平均溶出率为98%，而4批糖衣片的平均溶出率只有57%。可见糖衣片的溶出率大大的低于薄膜衣片，因此，包衣方式和剂型也影响着药物的溶出度和药物在体内的生物利用度。

　　综上，牛黄解毒片是一种中药复方制剂，干扰成分很多。本次试验主要是探讨纯中药制剂的溶出度的检测方法，并以药材自身的指标成份作为溶出度检查的控制指标，该方法灵敏、准确、快速，可用于牛黄解毒片的质量控制。

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