HPLC法测定肾安胶囊中迷迭香酸的含量
发布时间：2020-01-03
【摘要】目的:建立测定肾安胶囊中迷迭香酸含量的高效液相色谱法。方法:采用AgilentZORBAXSB-C18(150mm×4.6mm，5μm)色谱柱，乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)为流动相，流速:1mL/min，检测波长为330nm，柱温30℃。结果:迷迭香酸在11.7914～235.8274μg(r=0.9998)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=6)为99.5%，RSD为0.3%。结论:所建立的方法简便可行，结果准确可靠，可用于肾安胶囊中迷迭香酸的含量测定。
【关键词】肾安胶囊;HPLC;迷迭香酸;含量测定
肾安胶囊由石椒草、肾茶、黄柏、白茅根、茯苓、白术、金银花、黄芪、泽泻、淡竹叶、灯心草、甘草组成，具有清热解毒，利尿通淋的功效。用于湿热蕴结所致淋症，证见小便不利，淋沥涩痛，下尿路感染见上述症候者。肾茶为肾安胶囊中的主要成分，是一种对肾脏与泌尿系统疾病具有良好功效的热带稀有植物，全草有利尿、抗菌、溶石、排石作用。肾茶中的迷迭香酸为其主要活性成份之一[1]，不仅具有抗炎、抗菌、抗病毒、调节免疫等生物活性[2]，而且能防止草酸草结石的形成和改善肾功能[3]，还是肾茶中治疗慢性肾衰竭的主要成分之一[4]。在本品中起到清热解毒和改善肾脏功能的重要作用，故应该对其进行质量控制。本制剂现行标准[5]含量测定只控制了黄柏一味药，每粒含黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于0.16mg。为了能更加有效控制肾安胶囊的质量，因此采用HPLC法对本制剂中肾茶的主要成分迷迭香酸进行了含量测定方法学研究，为评价肾安胶囊的质量提供了更为准确可靠的方法。
1仪器与材料
1.1仪器岛津LC-20AD液相色谱仪(SPD-20A紫外检测器，四元泵，自动进样器，日本岛津公司);万分之一SartoriusBS224S型电子分析天平(Sartorius公司，美国);十万分之一DENVERTB-215D型电子分析天平(DENVER公司，美国);AS7240A超声清洗仪(天津奥特赛斯仪器有限公司)。
1.2材料迷迭香酸对照品(批号:111871-201102，中国食品药品检定研究院)。肾安胶囊(批号:120605、120709、130305、130514、130615)、阴性对照所用的药材均由云南保元堂药业提供。实验用水为超纯水，乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1溶液的制备
2.1.1对照品溶液取迷迭香酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含15μg的溶液。2.1.2供试品溶液取本品内容物混匀，取3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加0.001mol/L盐酸-甲醇(1∶1)混合液50mL，称定重量;超声处理10min冷，再称定重量，用0.001mol/L盐酸-甲醇(1∶1)混合液补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
2.1.2阴性样品溶液按处方比例制备缺肾茶的阴性空白样品，并按“2.1.2”项下制成阴性样品溶液。
2.2色谱条件色谱柱:AgilentZorbaxSB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83);流速:1.0mL/min;检测波长:330nm;进样量:5μL。在上述色谱条件下，取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液进样测定，结果其他药材并不干扰待测成分的测定，结果见图1。
2.3线性关系的考察分别精密吸取迷迭香酸对照品溶液1、2、4、6、8、10、20μL，按上述色谱条件，测定迷迭香酸峰面积。分别以迷迭香酸进样量为横坐标(X)，以峰面积积分值A为纵坐标(Y)，进行线性回归，得线性方程为:Y=2e+7X-1713.1(r=0.9998)，表明迷迭香酸在11.7914～235.8274μg范围内呈现良好的线性。
2.4精密度试验精密吸取对照品溶液5μL，连续进样5次，记录峰面积。RSD为0.6%，结果表明仪器精密度良好。
2.5重复性试验取同一批(批号为130305)肾安胶囊样品，按“2.1.2”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进行含量测定，结果迷迭香酸的含量为0.4528mg/g;RSD分别为0.5%，说明测量方法的重复性良好。
2.6稳定性试验按“2.1.2”项下方法制备一份供试溶液，精密吸取5μL，分别于0、4、8、12和16h各测定1次，结果5次测定所得的峰面积值的RSD为0.2%。结果表明，室温条件下，供试品溶液中的迷迭香酸在16h内稳定。
2.7加样回收试验分别精密称取9份已知含量的样品(批号为130305)每份约1.5g，精密称定。精密加入每1mL迷迭香酸对照品68.08μg的对照品溶液分别为三份12mL，三份10mL三份8mL，按“2.1.2”项下的方法制备供试溶液，进样分析，计算迷迭香酸平均回收率(n=9)为99.54%，RSD为0.3%。表明试验方法准确度好。结果见表1。
2.8样品中迷迭香酸含量测定分别称取不同批号的肾安胶囊，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件测定，以外标法计算含量，结果见表2。
3讨论
实验通过对提取方法，提取溶剂，提取时间，检测波长分别进行了考察及参照相关文献资料中的有迷迭香酸的含量测定方法[6-9]后进行改进，最后确定了以0.001mol/L盐酸-甲醇(1∶1)混合液为流动相，检测波长为330nm，流速1mL·min-1，样品超声处理(功率300W，频率25kHz)10min对本品迷迭香酸的含量进行测定，试验结果表明，缺肾茶的阴性样品溶液无干扰，且样品分离效果好。经方法学考察，本含量测定方法结果较好，方法可行。
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